Virginia Kolonisi'ndeki Jamestown yerleşimi, Amerika kıtasındaki ilk kalıcı İngiliz yerleşmesiydi. Powhatan Nehri'nin kuzeydoğu kıyısında, günümüz Williamsburg merkezinin yaklaşık 2.4 mil (4 km) güneybatısında yer almaktadır. 4 Mayıs 1607'de, Virginia Sömürge Başkanşığı tarafından "James Fort" olarak kuruldu. 1610'da kısa bir terkin ardından resmi olarak kuruluşu kayıt edildi. 1585 yılında Roanoke Adası'nda kurulan Kaptan Roanoke Kolonisi de dahil olmak üzere birkaç başarısız yerleşke girişimi izledi. Jamestown, 1616'dan 1699'a kadar sömürge başkenti (merkezüssü) olarak hizmet etti.

Yerleşim, Powhatan Konfederasyonuna ait olan Tsenacommacah kızılderili yerleşkesinde ve Paspahegh havzasında yer alıyordu. Yerliler başlangıçta tarımsal becerisi iyi olmayan sömürgeciler’e önemli düzeyde destek sağladılar. İlişkiler hızla güçlendi. İlk başta 8 Polonyalı, 9 Alman ve 1608 İngiliz’in gelişi ve sonradan gelen birçok Avrupalı yerleşimcilere ve yatırım sevkine rağmen, kolonistlerin %80’den fazlası 1609–10'da özellikle hastalıktan öldü. 1610'un ortalarında hayatta kalanlar ise bölgedeki hastalık ve diğer tehlikelerden dolayı Jamestown'u terk ettiler.